سرم 25-هیدروکسی ویتامین D  (25 (OH) D) اصلی ترین متابولیت در گردش خون ویتامین D است. روش های مختلفی برای اندازه گیری سرمی آن  گزارش شده است. این روشها شامل روشهای کروماتوگرافی (GC-MS ، HPLC و( LC-MS ، روش اتصال رقابتی به پروتئین (CPBA) ، رادیو ایمونواسی (RIA) و روشهای خودکار می باشد. علاوه بر این ، اخیراً حسگرهای زیستی بعنوان کاندیداهای بالقوه برای آنالیز روتین 25-هیدروکسی ویتامین D در سرم استفاده شده اند. در این بررسی روشهای متداول برای تعیین کمیت 25(OH)D2 و 25(OH)D3در نمونه های بیولوژیکی ، از جمله تهیه نمونه ها ، با هم مقایسه شده و مورد بحث قرار گرفته اند.